Методы выявления МБТ при диагностике туберкулеза

Микобактерии туберкулеза – МБТ открыты более 30 лет назад, однако до сих пор продолжается их изучение, что связано с высокой скоростью развития туберкулеза в обществе при инфицировании хотя бы одного человека.

• Методы, позволяющие выделить конкретный возбудитель
• Бактериоскопический метод
• Бактериологический метод

Свойства и опасность микобактерий

Эти микроорганизмы относят к семейству Лучистых грибов (Актиномицеты). Представляют собой различного размера палочки, способные к размножению путем простого деления или почкования. Они неподвижны и не способны к образованию спор. Обладают хорошей устойчивостью к различным факторам окружающей среды. Чаще всего их называют палочками Коха в честь первооткрывателя.

Палочки Коха являются грамположительными бактериями, что представляет собой их способность окрашиваться красным цветом при воздействии на них фуксина. Такой метод называется окраской по Цилю-Нильсену. Эта их особенность лежит в основе всех микроскопических способов выявления МБТ.

Микобактерий туберкулеза на данный момент известно множество видов. Наибольший интерес представляют микроорганизмы, опасные для человека и способные вызывать инфекционные заболевания.

К ним относится 2 вида:

• Mycobacterii tuberculosis,
• Mycobacterii africanum.

Палочки Коха обладают повышенной жизнеспособностью, поэтому лечение туберкулеза может длиться месяцами с последующим ежегодным контролем больного. Обусловлено это способностью их к персистированию и реверсии.

То есть микобактерии туберкулеза под действием лекарственных препаратов или агрессивных условий окружающей среды преобразуются в промежуточные, более устойчивые формы. Из такого вида они через определенное время возвращаются к исходному состоянию – после прекращения внешнего воздействия.

Важным для диагностики является химический состав возбудителя. Он хорошо изучен. Основу составляет вода и специальные белки (туберкулопротеины), которые являются чужеродными для человеческого организма. На этом построено массовое выявление туберкулеза на ранних этапах для любых возрастных групп – туберкулинодиагностика.

Свойствами МБТ являются:

• высокая степень патогенности (способность вызывать развитие заболевания за счет корд-фактора),
• склонность к массовому заражению в коллективах, особенно детских,
• невосприимчивость ко многим дезинфицирующим средствам,
• устойчивость к спиртам, кислотам и щелочи,
• непосредственное токсическое воздействие на клетки, блокирующие воспаление в организме человека – лейкоциты,
• изменчивость и способность к мутации, что обусловливает низкую эффективность определенных противотуберкулезных препаратов.

Корд-фактор представляет собой особое вещество, склеивающее МБТ между собой и обуславливающее тем самым их высокую концентрацию.

Крайне важным для недопущения эпидемии является своевременное выявление инфицированных пациентов. Для этого в настоящее время разработаны ежегодные профилактические осмотры во взрослых и детских коллективах. Задачей их считается определение наличия МБТ или уже развившегося тубзаболевания у конкретного человека.

Методы для раннего обнаружения инфицирования

К этой группе можно отнести туберкулинодиагностику и экспресс-тесты.

Первым этапом при проведении плановых осмотров является туберкулинодиагностика. Она является обязательной для детей, а также для взрослых при подозрении ни туберкулезную инфекцию. Лишь при положительных результатах проводится дальнейшее обследование с выделением МБТ из различных материалов.

Методы туберкулинодиагностики основаны на введении в кровоток специального лекарства, содержащего туберкулин (белок бактерии), или его аналогов. Препарат вводится внутрикожно. Через 72 часа оценивают результат.

Если пациент инфицирован либо переболел туберкулезом, то при инъекции чужеродных антигенов, организм отреагирует местной аллергической реакцией в виде папулы (красное пятно с пузырьком) на месте укола.

Существует 2 метода туберкулинодиагностики:

• проба Манту,
• Диаскинтест.

Преимуществом их является возможность применения с 1 года. Это наиболее безопасные и простые способы для определения инфицирования МБТ у детей.

Диаскинтест является хорошим современным препаратом, однако он не может заменить пробу Манту. Часто их назначают одновременно, особенно при положительных первых исследованиях. Однако эти методы лишь позволяют врачам заподозрить инфицированность микобактерией человека, но не могут дать 100% гарантию.

Минусами туберкулинодиагностики являются:

• частые ложноположительные результаты,
• невозможность представить полную оценку клинической картины,
• невозможность выявления конкретного возбудителя заболевания.

Однако туберкулинодиагностика является важным этапом для выявления МБТ при туберкулезе. Лишь после ее положительных результатов фтизиатр назначает последующее углубленное обследование.

В связи с необходимостью быстрой и более точной диагностики туберкулеза современная фтизиатрия предлагает к использованию так называемые экспресс-методы диагностики.

Они являются удобными, быстрыми, в большинстве случаев достоверными, однако их стоимость и необходимость соответствующего оснащения учреждения делают их невостребованными. Из экспресс-методов применяют:

1. Использование специальной индикаторной пробирки с флуоресцентными веществами. После посева рост МБТ наблюдается в течение 4-10 суток. По наличию или отсутствию свечения определяют положительный или отрицательный результат.

   При этом выявляется наличие возбудителя в исходном материале, но не его количество или определенный вид.

2. Газожидкостная хроматография основана на обнаружении специфических структур, свойственных только МБТ.
3. Метод моноклональных антител основан на иммуноферментном анализе. Помогает определить вид возбудителя. Минусом является то, что можно обнаружить при этом только несколько форм МБТ.
4. Применение ДНК-зондов.
5. ПЦР.

4 и 5 методы позволяют выявить МБТ в исходном материале на 2-4 сутки. Это высокоэффективные способы, позволяющие выявить вид и форму возбудителя в самые ранние сроки.

Методы, позволяющие выделить конкретный возбудитель

С учетом развития современной науки и медицинской техники, фтизиатрия предлагает много способов для выявления МБТ.

Наиболее часто в клинической практике применяются:

1. Бактериоскопия: прямая, люминесцентная, фазово-контрастная, флотационная.
2. Бактериология.
3. Биологические методы.

Сущность этих методов состоит в проведении лабораторных исследований, при которых из различных материалов выделяют МБТ. Для этого при легочном туберкулезе чаще всего используют мокроту. При внелегочном туберкулезе исследуют:

• мочу,
• плевральный выпот,
• спинномозговую жидкость,
• каловые массы,
• выделения свищей, пунктаты,
• промывные воды желудка.

Мокроту больной собирает с утра натощак в специальный контейнер. Если ее выделяется небольшое количество, то допустим сбор в течение дня. Часто у больных с туберкулезом кашля может и не быть. При этом проводят бронхоальвеолярный смыв или бронхоскопию. В последнем случае при проведении процедуры проводят бронхоальвеолярный лаваж с последующей биопсией «подозрительных» участков.

Промывание желудка и последующий сбор промывных вод часто назначают детям, не умеющим хорошо откашливать мокроту (особенно младшие возрастные группы). Это более щадящий метод, чем бронхоскопия.

Анализ мочи на микобактерии туберкулеза проводят при подозрении на инфицирование ими почек. Показанием для этого является обнаружение в осадке большого количества лейкоцитов (более 15 в каждом поле зрения).

Выявление МБТ в цереброспинальной жидкости важно для диагностики туберкулезного менингита, однако эффективность данной процедуры невелика.

Любой полученный от больного материал подлежит специальной подготовке мазков из него для дальнейшего исследования в зависимости от метода, назначенного фтизиатром. Анализы проводятся только в противотуберкулезных учреждениях специально обученным медицинским персоналом.

Бактериоскопический метод

Суть состоит в окрашивании специальными красителями препаратов, полученных из материала больного, с последующим рассмотрением их под микроскопом.

При прямой бактериоскопии, после окраски мазка по Цилю-Нильсену, врач его тщательно изучает. МБТ при этом имеют вид красных палочек, которые хорошо видны под микроскопом. Анализ проводится достаточно быстро, но он позволяет обнаружить возбудителя только при большом его количестве в исходном материале.

Делают бактериоскопию несколько дней подряд. Результаты записывают на определенные бланки. Указывается при этом вид (грамположительная палочка) и приблизительное количество.

Наиболее эффективными являются люминесцентная и фазово-контрастная микроскопия. В первом случае флуоресцентно окрашенный препарат изучают при облучении ультрафиолетовыми лучами.

Это позволяет в более короткие сроки рассмотреть большое количество препарата и точнее установить диагноз.

При проведении фазово-контрастной бактериоскопии врач может наблюдать МБТ и их различные формы в живом состоянии. Такой вид исследования является единственным способом выявления возбудителя, позволяющим его зафиксировать «вживую». Это достигается путем использования специального фазово-контрастного оборудования. Такой метод исследования позволяет поставить правильный диагноз в большинстве случаев. Минусом является высокая стоимость медицинских устройств.

При любом проведенном виде бактериоскопии врач делает заключение, в котором указываются:

• найденные формы МБТ,
• вид,
• среднее количество МБТ.

Второй показатель имеет наибольшее значение для оценки динамики проводимой терапии.

Бактериологический метод

Важное клиническое значение при выявлении МБТ имеет посев на специальные среды. При наличии палочки Коха в исходном материале будет происходить рост их колоний. Плюсом этого является возможность выявления возбудителя при малой его концентрации в начальной жидкости, из которой делаются посевы.

Главный недостаток бактериологического метода – большое время ожидания результата, которое составляет от 3 недель и дольше. Обусловлено это крайне медленным ростом колоний МБТ после посева на питательной среде.

Неотъемлемой частью при проведении бактериологического метода, когда получены возбудители заболевания, является определение их чувствительности к противотуберкулезным препаратам.

При выдаче результатов врач обязан указать КОЕ (колониеобразующие единицы) в посеве. Их количество важно для интерпретации полученных данных. В заключении оно указывается следующим образом:

1. Скудное, когда обнаруживается до 20 КОЕ.
2. Умеренное, если их количество доходит до 100.
3. Обильное, когда выявляется свыше 100 КОЕ.

При 1 варианте необходимо обязательное повторное исследование, потому что такое количество КОЕ не является достоверным для постановки диагноза.

При выявлении чувствительности к противотуберкулезным средствам в заключении указывается наиболее распространенный список лекарств, используемых фтизиатрами для лечения заболевания. Около названия каждого препарата латинскими буквами ставится – S или R. S обозначает чувствительность МБТ к данному лекарству, R – резистентность (устойчивость).

Один возбудитель может быть восприимчив как к одному, так и к нескольким препаратам, исходя из этого, фтизиатр назначает рациональную терапию.

Биологический метод исследования является, скорее, теоретическим. Заражение лабораторных животных различными видами МБТ с последующим их выделением и изучением носит научный характер и в реальной клинической практике практически не применяется.

При туберкулезе выявление МБТ происходит различными методами. Чаще всего в клинической практике используют несколько способов для обнаружения возбудителя, обязательно включающих посев на специальные среды. Такие методы являются абсолютно безопасными и широко применяются при диагностике туберкулеза у детей и взрослых.

(Пока оценок нет)

Загрузка...